Hippocampal neuronen 4 legpuzzel

Distributie van historische neuronen die EGFP uitdrukken van de Nr4a1/Nur77-promotor (Tg(Nr4a1-EGFP)GY139Gsat, www.gensat.org) in voorstad CA1 met het label "vesiculair glutamaat transporter" (VGluT1, red, Invitrogen polyclonal", 1:10 00) en met (blauwe) DAPI aan de cellagen van het show bevlekt. De expressie van EGFP werd versterkt met anti-GFP voor kippen (Abcam, 1:2000). VGluT1 etiketteert de prikkelende terminals in de dendritische velden van de piramidale cellen in stratum orien stratum radiatum. Nr4a1-EGFP wordt sterk uitgedrukt door CA1-piramidale cellen en in mindere mate in CA3-piramidale cellen met dunne cellen in de gyrus dentate (zie de bijbehorende afbeeldingen). Sectie (40 um, sagittal) werd opgezet met Fluoromount G en met een 32X, 0.4 NA LD Achroplan-doelstelling op een Zeiss Axiovert microscoop in beeld gebracht. AF568 werd opgewekt bij 562/40 nm en de emissie werd opgevangen bij 624/40 nm met Semrockfilters en een enkele band dichroom (530-585 nm gereflecteerd, 601-800 nm verzonden). AF488 werd opgewekt bij 482/35 nm en de emissie werd opgevangen bij 536/40 nm met Semrockfilters en een enkele band dichroom (446-499 nm gereflecteerd, 513-735 nm verzonden). DAPI werd opgewekt bij 350/50 nm en de emissie werd verzameld bij 460/50 nm met een CLP400 dichroic (Chroma). De enige afbeeldingen werden gevangen voor elk kanaal gebruikend een Zeiss Axiocam MR CCD en pseudo-gekleurd gebruikend Axiovision. Lineaire achtergrondaftrekking werd gebruikt op het afbeelding in kwestie. Zie Davis en Puhl (2011), Pubmed ID 21305052, voor een gedetailleerd kleuringsprotocol en afbeeldingen van EGFP-expressie in het striatum en amygdala in deze stam. Dit afbeelding maakt deel uit van een reeks die de expressie van EGFP door de Nr4a1-promotor in de gehele hersenen karakteriseert.